用葡萄糖生物传感器测定发酵过程微生物活细胞数研究

三、 测定结果
　1．不同浓度的微生物细胞对葡萄糖的利用情况
以下是我们对摇瓶培养23小时的酿酒酵母发酵液多级稀释后，20分钟时间实际消耗葡萄糖的测定结果，表中细胞浓度通过平板培养计数法测定。

表一：不同稀释比例酿酒酵母发酵液20分钟耗糖值

把上表的平均值数据按细胞浓度作图，如结果如下：



　　

实验结果显示，当细胞浓度低于2×107时菌体对葡萄糖的利用速度较快，当菌体浓度高于2×107后，葡萄糖的消耗与菌体浓度有较好的线性关系，在作计数测定时，必须对此非线性提供补偿。
　2． 样品的重复测定试验：
实验结果是否能重复是测定方法是否可行的根本依据，为了验证葡萄糖消耗法测试细胞数这一方法，我们分别对二次摇瓶培养的酿酒酵母作了重复计数测定，实验结果显示：对于同一样品，仪器测定有较好的重复性，测定误差小于10%。

表二：酿酒酵母发酵原液6次测定实验结果

表三：酿酒酵母用磷酸缓冲液稀释5倍后，测定6次实验结果

　3． 测量范围
　实际测定的数据显示，本仪器测定的微生物细胞数的分辨率为106数量级，当微生物细胞数小于这个数量级时，葡萄糖生物传感器的测定精度和细胞对葡萄糖消耗的非线性使测定结果误差太大，失去参考价值。
　四、 小结
　利用微生物活细胞对葡萄糖的消耗数量，推测微生物活细胞的数量，原理明确、操作简便，测定可靠性高，但需要对不同的细胞生长期建立葡萄糖消耗与细胞数量的相关模型，保证测定结果的准确性。对于工业微生物发酵生产，因为发酵的条件基本一致，所以模型建立相对容易，本方法具有实用价值，当发酵异常时，测得的细胞数可能不准，但异常的数据能对发酵控制提供及时的警告信息。